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Ceturegel®基质胶应用——肝癌类器官构建

据ourworldindata数据统计,截止到2019年,肝癌的死亡率位居中国所有癌症死亡数的第四;据世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)数据统计,2020年全球新发癌症病例1929万例,中国新发癌症457万例,其中肝癌在全球新发病例在91万例,中国约41万例,占全球的45%[1]。英国剑桥大学Broutier等人在2017年发表的一篇文章中开发出一种新的、接近原发性肝癌 (PLC) 的类器官,这项成果对肝癌病理生理的认识并实现药物筛选上有极大的提升,该研究结果发表在《自然·医学》杂志上[2]
 图:源自ourworldindata

 

类器官(organoids)是指利用干细胞、祖细胞、肿瘤细胞等在体外培养出的3D细胞培养物并具有一定的空间结构组织类似物。作为疾病模型,相比于传统2D疾病模型,类器官在阐明疾病的发展、稳态性和发病机理等与体内环境更加接近。类器官主要由成体干细胞或肿瘤样本在适宜的培养条件下构建。与细胞外基质(基质胶)混合是关键的步骤之一,为类器官提供3D生长载体。基质胶主要成分由层粘连蛋白,Ⅳ型胶原,硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)和巢蛋白等组成,还包含生长因子、组织纤溶酶原激活物和EHS肿瘤自身含有的其他生长因子。为组织和细胞提供支撑、抗拉强度和支架支撑等。世界杯买球网站开发生产的Ceturegel®基质胶不含LDEV(乳酸脱氢酶增高病毒),超低内毒素含量,并全部经过支原体检测保证无支原体污染,包括基本浓度、高浓度、低生长因子等不同类型基质胶。
Ceturegel®基质胶
 

应用方向

 
 
 

产品特点

 
安全性高:不含LDEV(乳酸脱氢酶增高病毒)
浓度多样性:浓度范围在8~20 mg/mL之间
批次稳定性好:严格生产质检过程保证批次间性能稳定
低内毒素:内毒素含量<8 EU/mL
污染物检测: 经检测无支原体和细菌、真菌残留
产量高:产量在50L/月以上
兼容性好:可与任何类型的细胞培养基兼容
 
 

肝癌类器官构建

实验步骤

1.将移液枪头置于冰上预冷,基质胶置于冰上或4℃缓融,24孔细胞培养板置于37度预温。
2.取对数生长期HepG2细胞,使用PBS轻柔润洗并用胰蛋白酶消化细胞。
3.终止消化后制备并收集单细胞悬液,1500 rpm离心3min,弃上清并用DMEM完全培养基重悬细胞,调整细胞浓度为1.0×106cells/mL。
4.细胞接种:取缓融后的基质胶和调整好浓度的单细胞悬液1:1冰上轻轻混匀,用预冷的200μL移液枪头取40~50μL上述混匀单细胞悬液垂直滴于预冷24孔板中,使其形成拱型细胞液滴。
5.于37℃、5%CO2饱和湿度的细胞培养箱内稳定30min后,每孔加入500~2mL肝癌类器官完全培养基继续培养。
6.每天观察并拍照记录,约5-7天可观察到均匀肝癌类器官。

 

实验结果

图:Hepg2细胞系源的类器官5天培养结果
 
 

FAQ

1.基质胶的操作要注意哪些事项?
所有操作需在无菌环境下进行,应使用预冷的移液器以保证基质胶呈匀浆状。

 

2.基质胶的如何分装冻存使用?
可将冻融后的Ceturegel®基质胶分装在多个小管,所有分装均需用预冷的冻存管,迅速冷冻并保存,避免多次。

 

3.不同孔板培养类器官培养所需的基质胶和培养基体积?
培养类器官常用的是24孔板培养,按50μl/孔形成胶滴,再加入500~800μl培养基覆盖胶滴;96孔板按10μl/孔形成胶滴,再加入200μl培养基覆盖胶滴;6孔板每孔可以种植多个50μl胶滴,加入2~3ml培养基覆盖胶滴。

 

 

产品选择

产品类型

产品名称

产品货号

规格

基本浓度

Ceturegel®Matrix LDEV-Free基质胶

40183ES08/10

5/10 mL

Ceturegel®Matrix Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶

40184ES08/10

5/10 mL

低生长因子

Ceturegel®Matrix GFR,LDEV-Free 基质胶

40185ES08/10

5/10 mL

Ceturegel®Matrix GFR,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶

40186ES08/10

5/10 mL

高浓度

Ceturegel®Matrix High Concentration,LDEV-Free 基质胶

40187ES08/10

5/10 mL

Ceturegel®Matrix High Concentration,Phenol Red-

Free,LDEV-Free 基质胶

40188ES08/10

5/10 mL

Ceturegel®Matrix High Concentration,GFR,LDEV-Free 基质

40189ES08/10

5/10 mL

干细胞专用

Ceturegel®Matrix hESC-Qualified,LDEV-Free 基质胶

40190ES08/10

5/10 mL

类器官专用

Ceturegel®Matrix for Organoid culture,Phenol Red-

Free,LDEV-Free 基质胶

40191ES08/10

5/10 mL

 

Collagen,Type I,from rat tail 鼠尾胶原蛋白I

40125ES10/50

2/10 mL

 
 

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产品名称

产品编号

规格

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41421ES30/60

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41422ES30/60

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[1] https://www.iarc.who.int/faq/latest-global-cancer-data-2020-qa/
[2] Broutier, L., Mastrogiovanni, G., Verstegen, M. et al. Human primary liver cancer–derived organoid cultures for disease modeling and drug screening. Nat Med 23, 1424–1435 (2017). https://doi.org/10.1038/nm.4438

400-6111-883

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