Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays ADCC检测用Jurkat效应细胞株

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产品信息

 

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays   

ADCC检测用Jurkat效应细胞株

42001ES03

1mL(5E6 Cell/mL)

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产品描述

 

抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)是抗体发挥作用的方式之一,当IgG抗体通过Fab段与靶细胞(病毒感染的细胞及肿瘤细胞)表面抗原决定簇特异性结合后,其Fc段可与有FcγR的杀伤细胞(NK细胞、单核-巨噬细胞、中性粒细胞)等效应细胞结合,触发效应细胞的杀伤活性,直接杀伤靶细胞(病毒感染的细胞及肿瘤细胞)。

image.png 

图:抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)

ADCC检测用Jurkat效应细胞株为改造后的NFAT-Luc-FcγRIIIa Jurkat稳定细胞株(原始株来源于中科院细胞库),可由CD20抗体,B细胞淋巴瘤细胞(Raji、PBMC、WIL2-S细胞系为靶细胞建立ADCC生物学活性检测方法。世界杯靠谱买球平台开发的Jurkat效应细胞株无菌无支原体污染细胞株为单克隆细胞株,可用于ADCC作用机制验证糖基化水平检测、抗体筛选等应用

 

产品组分

 

组分编号

组分名称

产品编号/规格

42001ES03

42001

Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays

1mL(5E6 Cell/mL)

 

运输与保存方法

 

干冰运输。收到之后如不立即复苏,请立即转入-80℃保存或液氮储存。

 

产品应用

 

1. Jurkat效应细胞株运输与保存

【注】:细胞株对温度非常敏感,避免反复冻融。收到产品后,如果暂时不使用,请整瓶直接放到-80℃冻存或液氮内。

2. Jurkat细胞株复苏使用特别注意

打开水浴锅,等待升温达到设置的37 ℃后,放入配制好的种子培养基进行预热30±10 min冻存管立即置于37℃水浴中解冻(控制在3 min内),溶解完全即可拿出,解冻过程中勿使水浴锅水面浸过冻存管管口。此细胞株血清使用要求严格,检测时使用推荐超低 IgG胎牛血清。(推荐:货号:1921005PGGibco

2).抗体检测ADCC

细胞Jurkat效应细胞raji细胞株200 g1000 rpm 离心5 min 后用ADCC缓冲液RPMI 1640培养基+4%IgG FBS)重悬洗涤一次后,计数,调节活细胞密度(raji推荐5E5 Cells/mLJurkat推荐3E6 Cells/mL)可进行调试标靶比, Jurkat效应细胞株密度建议不调整。细胞株活率>95%。方可进行实验。一般活率在98-99%之间。

稀释抗体将抗体调节较高浓度成20 µg/mL后,进行梯度稀释低浓度时如3 µg/mL可按2-3倍进行梯度稀释高浓度可按5倍稀释。先确定细胞的检测抗体浓度范围后,再进行浓度和梯度稀释比例的调整。

1、75 µL ADCC Buffer添加到96孔的最外面的孔中,封液,防止蒸发。

2轻轻吹打raji细胞悬液,加入25 µL细胞悬液每孔

3从抗体稀释板中每孔加入25 µL抗体稀释系列,加入到细胞孔内。空白不加抗体,加入25 µL ADCC缓冲液。建议从低浓度到高浓度进行添加。

4、轻轻吹打Jurkat效应细胞悬液,然后在实验台上添加25 µL Jurkat效应细胞,则每孔抗体浓度稀释三倍。(母液浓度为3 µg/mL,则检测起始起始浓度为1 µg/mL。

5用盖子盖住板,在37°C加湿的CO2中孵育6小时。

637°C的培养箱中取出检测板,并将其平衡到环境温度(22-25°C),一般放置20-30 min即可。

7使用手动多通道移液管,添加75 µL Bio-Glo™荧光素酶分析试剂到所有内部96孔板避免制造任何泡沫。孵育5分钟后用酶标仪在白板中读取相对光单位(relative light units,RLU)数值,并按照以反应-阴性作图。

阴性:Jurkat效应细胞株+靶细胞,不含抗体Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit检测值

反应:Jurkat效应细胞株+靶细胞,含抗体Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit检测值

例:TECAN Spark 酶标仪检测设置:Luminescence,360-700 nm,实验检测时间设为10000 m sec;settle time:1 sec

SpectraMax M5酶标仪检测使用设置:Luminescence,All  nm,实验检测时间设为500-1000m sec;settle time1 sec

3)实验结果

①抗体检测:

TECAN Spark 酶标仪检测设置:Luminescence,360-700 nm,实验检测时间设为10000 m sec;settle time:1 sec

使用3 µg/mL母液抗体浓度,按2.5倍稀释,稀释13倍;抗体为:Rituximab, E:T=6:1

image.png 

图:检测值比较明显值在(log -10-6的区间内)

 

注意事项

 

1、反应温度:酶促反应对温度较为敏感,加样检测前务必将所有试剂平衡至室温(20-25℃)再使用。

2Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit应在环境温度不超过27℃使用,使用时解冻后继续在室温下孵育20-30分钟96孔白板温度保持一致

3、检测仪器:能检测化学发光的仪器都适用,但由于不同仪器的设置检测时间段和灵敏度不同,测得的光信号值也会不同。

4检测板:为防止孔间干扰,推荐使用不透光白色酶标板。

5本产品仅作科研用途,禁止应用于人体

6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

HB220330

400-6111-883

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